HLA-типирование супругов

HLA-типирование супругов

HLA типирование супругов – один из методов определения причин бесплодия, который основан на изучении иммунологических особенностей организмов мужчины и женщины. Суть методики заключается в определении «совместимости» партнеров.

Особенности HLA-совместимости

HLA антигены – это особые маркеры, которые присутствуют абсолютно во всех клетках живого организма. Они представлены уникальным набором различных последовательностей белковых молекул, которые у разных людей отличаются.

Данные структуры существуют в организме для идентификации «своих» и «чужих» клеток. В норме при проникновении чужеродных микроорганизмов (вирусы, бактерии) или пересадке донорских органов тут же запускаются иммунные реакции, которые проявляются уничтожением соответствующих клеток.

Если в случае с вирусами и патогенными микробами – это хорошо, то при трансплантации пациенты должны употреблять иммунодепрессанты для нормального функционирования нового органа или части тела. По такой же схеме работает противораковая защита организма. Мутирующие клетки тут же распознаются и уничтожаются.

В случае беременности (нормальном её протекании) плод является наполовину «чужим» для материнского организма, поскольку 50% генетического материала он получил от отца. Ребёнок не отторгается из-за механизма синтезирования блокирующих антител, которые предотвращают его гибель. Однако при слишком сильной схожести наборов антигенов у супругов, данный процесс нарушается.

Если анализ HLA типирование фиксирует наличие слишком частых сходств в соответствующих последовательностях мужчины и женщины, это может быть главным фактором невозможности выносить плод. Причина в том, что материнский организм вырабатывает недостаточное количество блокирующих антител. Соответственно ребёнок рассматривается им не в роли «защищенного чужака», а в виде измененных собственных тканей, которые нужно уничтожить.

Как проводится анализ HLA?

HLA совместимость изучается в ряде ситуаций. Показаниями для проведения исследования являются:

• Бесплодие неясного генеза.
• Привычное невынашивание беременности.

Некоторые врачи в подобных ситуациях предлагают своим пациентам пройти HLA типирование. Расшифровка конечных результатов позволит выявить «совместимость» супругов. Тем не менее, данный метод является не единственным способом установления причины патологии. Кроме того, он имеет ряд серьезных недостатков.

Сам процесс исследования полиморфизма HLA-антигенов может проводиться двумя способами:

1. Классический (серологический). В данном случае на основе микролимфоцитотоксического теста проводится анализ наличия специфических антител, позволяющих установить сходство или различие в соответствующих наборах белковых молекул супругов.
2. Молекулярно-генетический. В данном случае используется полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет более точно оценить наличие уже конкретных генов, кодирующих появление HLA-антигенов.

Лучшим и более востребованным остается именно молекулярно-генетическое HLA типирование. Результаты такого исследования более точны. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты встречаются значительно реже.

HLA и ЭКО

При наличии ранее неудачных попыток ЭКО или привычном невынашивании, врачи иногда рекомендуют сдать HLA анализ на совместимость супругов. Это позволит установить присутствие конкретной проблемы и выбрать правильную методику подготовки к соответствующей процедуре. В основном принимается решение о начале иммуномодулирующей терапии, которая позволяет избежать отторжения плода организмом матери.

Анализ на HLA типирование сдать можно в ряде репродуктивных клиник, которые занимаются преодолением бесплодия. На основе изучения 5-9 генов проводится анализ совместимости соответствующих комплексов у супругов. Такие центры предлагают своим пациентам пройти HLA типирование. Расшифровка результатов чаще всего занимает всего несколько дней.

Минусы исследования

HLA типирование супругов, цена которого иногда может быть достаточно высокой (в зависимости от конкретной клиники), имеет несколько очень важных свойств, делающих его не слишком информативным исследованием. Главными из них являются:

• Изучение только 5-9 генов в процессе типирования. Если учесть, что за формирование комплекса HLA отвечает более 100 генов, очевидно, что такая диагностика не является достоверной.
• Стоимость такой услуги как HLA типирование. Цена на каждый отдельный набор генов отличается. Для полного обследования иногда нужно заплатить около 20 тысяч рублей.
• Относительно небольшое число клиник, где можно пройти HLA типирование. Москва и другие крупные города предлагают соответствующую услугу своим пациентам, но в большинстве городов она остается недоступной.

Врачи «ВитроКлиник» считают нецелесообразным прохождение теста на HLA типирование. Стоимость его значительно выше реальной информативности. В большинстве случаев все равно приходится назначать дополнительные методы обследования супругов, так как HLA типирование не позволяет однозначно определить причину бесплодия.

Частой причиной, по которой не наступает беременность и происходит невынашивание беременности - это генетическая несовместимость супругов, точнее, совместимость их по HLA-антигенам.

К примеру, супружеская пара: оба здоровы, а беременности срываются на раннем сроке. Первым делом причину ищут в инфекциях, потом гормонах, далее обследуют на предмет аутоиммунных заболеваний (красная волчанка и т.д). После этого пару направляют в генетический центр, где сдается анализ на генетическую совместимость - HLA-типирование.

Что означает анализ на генетическую совместимость HLA-типирование?

HLA (human leucocyte antigens) - антигены тканевой совместимости, то есть: в нашем организме преимущественно на поверхности клеток крови есть такие белки, называются антигены. У каждого человека свой индивидуальный набор этих HLA-антигенов. Анализ на генетическую совместимость определяет, какие антигены имеют супруги. В идеале, они должны иметь разные HLA-антигены. Если происходит сходство по нескольким HLA-антигенам, то это может быть причиной прерывания беременности или ненаступления беременности.

Белки HLA нужны для определения: "своя" это клетка или "чужая". Если это чужие клетки, например, бактерии, то запускается иммунный ответ, благодаря чему уничтожаются чужие антигены. Это защитная функция организма.

Почему происходит выкидыш при генетической совместимости или не наступает беременность?

Ребенок при наследовании антигенов тканевой совместимости наследует половину антигенов от мамы, а половину от папы. Антигены должны быть разные! Вследствие этого ребенок, наполовину мамин, а наполовину папин. Тогда, организм женщины понимает, что это беременность, и запускает иммунологическую реакцию на сохранение беременности. Эти чужие клетки зародившегося ребенка воспринимаются как чужие, но материнский организм их не атакует, потому что вырабатываются защитные антитела для ребенка. Поэтому совместимость (когда разные антигены) по HLA-антигенам крайне важна при беременности для вынашивания малыша.

Когда антигены родителей совпадают, то женский организм воспринимает беременность, как свои клетки, поэтому не запускается в достаточной мере иммунологическая реакция на защиту ребенка. Плод становится незащищенным от атаки материнской иммунной системы. Это становится причиной невынашивания беременности и выкидыша. По этой же причине у некоторых пар не наступает долгожданная беременность.

Что представляет собой анализ HLA-типирование?

Для проведения анализа на HLA-типирование необходимо супругам сдать кровь из вены. Из сданного материала выделяются лейкоциты, так как на них лучше представлены HLA-антигены. Исследование проводят методом цепной полимеразной реакции. Результат анализа выдаст расшифровку, сколько совпадений у супругов. Консультацию проводит генетик. Даже если есть совпадения, это не конец, на сегодняшний день существует терапия, которая помогает зачать и сохранить беременность.

Что делать при генетической совместимости по HLA-антигенам?

Беременности при генетической несовместимости сохраняли еще 30 лет назад. Тогда брали кусочек кожи у супруга и подшивали ее беременной. Вся атака иммунной системы матери шла на чужеродный лоскут кожи, а не на ребенка. Также чистилась кровь различными препаратами, и подавлялся материнский иммунитет. Сейчас дело обстоит лучше. Медицина продвинулась вперед.

Существуют определенные методики и препараты, которые помогают, как забеременеть при генетической совместимости, так и выносить, сохранить ребенка. Эта проблема не единична. Дети в таких семьях рождаются нормальными, полноценными. Хотя врачи могут предупреждать, что у детей может быть ослаблена иммунная система.

Главное для такой пары найти хорошего специалиста, который бы вел их с момента зачатия и до родов. При этом нужно выполнять все требования врача. Без медикаментозного сохранения беременности таким супругам не обойтись.

Почему происходит генетическая несовместимость, сказать сложно. Главное не расстраиваться и идти к цели - иметь детей. Все возможно!

Среди причин бесплодия особое место занимают генетические и иммунологические факторы. Особое – потому что они не поддаются коррекции либо корректируются очень сложно. Эти же обстоятельства оказывают влияние не только на возможность зачатия, но и на течение беременности и здоровье будущего ребенка, нередко становясь причинами выкидышей или врожденных заболеваний. Поэтому анализ кариотипа супружеской пары и HLA-кариотипирование – исследования, необходимые для выявления причин бесплодия и минимизации рисков генетических аномалий.

Зачем сдавать анализы кариотипа и HLA?

Кариотипом называют признаки хромосом, присущие отдельному организму, – их форму, число, строение и прочие. В некоторых случаях измененные хромосомы, никак себя не проявляя и не оказывая влияния на носителя, становятся причиной бесплодия, появления генетических заболеваний у ребенка или замершей беременности. Кариотипирование – это процедура исследования крови, которая призвана выявить у обоих родителей хромосомные перестройки, а также изменение расположения их фрагментов. Анализ может проводиться без аберраций или с аберрациями. Во втором случае это расширенное исследование, позволяющее рассчитать количество аномалий и выявить их воздействие на геном.

Второе исследование называется HLA-типирование ; оно подразумевает определение у супругов антигенов тканевой совместимости (Human Leucocyte Antigens), набор которых у каждого человека также индивидуален. Благодаря их молекулам организм различает чужеродные клетки и вырабатывает против них специфические антитела. Если HLA у будущих родителей сходны, можно говорить об : организм воспринимает зародыша как чужеродное тело и отторгает его.

Стоимость в клиниках и лабораториях Москвы

В таблице указана примерная стоимость анализов в нескольких лабораториях Москвы.

Отметим некоторые особенности анализов в указанных клиниках:

1. Исследование кариотипа довольно длительное – 21-23 дня. HLA-типирование занимает 5-7 дней.
2. В большинстве клиник предлагаются также комплексные генетические исследования, направленные на диагностику вероятности возникновения отдельных заболеваний у ребенка (например, муковисцидоза, аутизма и прочих).
3. Цена указана без стоимости забора крови (200-300 рублей) и консультации генетика (от 1500 р.)

Трактовать результаты исследований должен исключительно врач! Они не являются диагнозом и основанием для самолечения!

Показания к проведению исследований

Оба анализа не являются обязательными при . Как правило, они назначаются в следующих случаях:

1. Женщинам, планирующим беременность в возрасте старше 35 лет.
2. Супругам, у которых уже были случаи рождения детей с врожденными заболеваниями.
3. Женщинам с привычной невынашиваемостью.
4. Семьям, в которых были неоднократные случаи выкидышей на ранних сроках.
5. Парам, страдающим бесплодием.
6. В том случае, если в ходе УЗИ были выявлены отклонения в развитии плода.
7. В рамках обследования перед

HLA - human leucocyte antigens - антигены тканевой совместимости. (cиноним: MHC - major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости).

На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены). Название HLA - антигены было дано в связи с тем, что эти молекулы наиболее полно представлены именно на поверхности лейкоцитов (клетки крови). Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов.

Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Синтез белков HLA - системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:

• I класс включает гены локусов А, В, С;
• II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ).

HLA антигены I класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, в то время, как белки тканевой совместимости II класса выражены преимущественно на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках.

Антигены тканевой совместимости участвуют в распознавании чужеродной ткани и формировании иммунного ответа. HLA - фенотип обязательно учитывается при подборе донора для процедуры трансплантации. Благоприятный прогноз пересадки органа выше при наибольшем сходстве донора и реципиента по антигенам тканевой совместимости.

Доказана взаимосвязь между HLA-антигенами и предрасположенностью к ряду заболеваний. Так, практически у 85% больных анкилозирующим спондилитом и синдромом Рейтера выявлен HLA В27 антиген. Более, чем у 95% больных инсулинозависимым сахарным диабетом определяются HLA DR3, DR4 антигены.

При наследовании антигенов тканевой совместимости ребенок получает по одному гену каждого локуса от обоих родителей, т.е. половина антигенов тканевой совместимости наследуется от матери и половина от отца. Таким образом, ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта "чужеродность" является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" (блокирующие) антитела.

Несовместимость супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. При нормальном развитии беременности "блокирующие" антитела к отцовским антигенам появляются с самых ранних сроков беременности. Причем, самыми ранними являются антитела к антигенам II класса гистосовместимости.

Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к "похожести" зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. Беременность воспринимается, как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности.

Для определения антигенов тканевой совместимости у супругов проводится HLA-типирование. Для проведения анализа берется кровь из вены, и из полученного образца выделяют лейкоциты (клетки крови, на поверхности которых наиболее широко представлены антигены тканевой совместимости). HLA-фенотип определяется методом цепной полимеразной реакции.

Альтернативные названия: Генное типирование по HLA-B27, англ.: Ankylosing spondylitis HistocompatibilityAntigen.

Определение иммуногенетического маркера HLA-B27 - метод молекулярно-генетического исследования, заключающийся в выявлении в генотипе наличия или отсутствия специфической 27 аллели локуса B. Ген с данной аллелью отвечает за синтез одного из антигенов гистосовместимости, характерного для некоторых аутоиммунных заболеваний, а именно для спондилоартропатий (патологий осевого скелета).

Частными случаями подобных заболеваний являются:

1. Болезнь Бехтерева.
2. Синдром Рейтера.
3. Ювенильный ревматоидный артрит.
4. Псориатический артрит.

Чаще всего эта аллель выявляется при так называемых «серонегативных» вариантах этих заболеваний, когда другими методами подтвердить их невозможно, то есть типичные анализы на ревматоидный фактор и аутоантитела дают отрицательный результат.

Гены HLA расположены на коротком плече VI хромосомы. Для них характерна высокая степень полиморфизма – наличие большого количества вариантов аллелей. Конкретно для HLA-B определено 136 аллелей, многие из которых встречаются только людей определенной расы или национальности.

Материал для исследования: венозная кровь в объеме 5 мл.

Метод исследования: ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Особой подготовки к анализу не требуется. Не рекомендуется курить непосредственно перед сдачей крови.

Показания к определению уровня HLA-B27

Анализ используют для дифференциальной диагностики, так называемого суставного синдрома, включающего следующие симптомы:

• асимметричный олигоартрит (поражается один или два сустава с одной стороны);
• боль в поясничной области;
• утренняя скованность суставов более 1 часа;
• энтезит – боль в местах фиксации связок к костям.

Целесообразно назначение анализа при ревматоидном артрите.

В широкой практике метод используется для скрининга, первичной диагностики и оценки прогноза анкилозирующего спондилоартрита.

Референсные значения и интерпретация результатов

Анализ носит качественный характер, то есть данная аллель либо определяется, либо нет.

Отрицательный результат отмечается у большинства людей и свидетельствует об относительно низком риске развития спондилоартропатий, хотя полностью не исключает вероятность их развития.

Положительный результат у людей с суставным синдромом свидетельствует о наличии одной из аутоиммунных спондилоартропатий. В случае положительного результата у здорового человека при проведении скрининга считается, что риск развития вышеупомянутых заболеваний приблизительно в 20 раз выше. Положительный результат у здоровых людей встречается у 7-8% населения. Однако это не значит, что человек обязательно заболеет.

Дополнительные сведения

Ложноположительные результаты отмечаются при разрушении лимфоцитов образца крови, поэтому анализ должен быть проведен в течение 24 часов с момента взятия крови.

Типирование HLA-B27 очень важно при ранней диагностике анкилозирующего спондилоартрита. С момента проявления первых признаков заболевания до появления развернутой клинической картины, позволяющей без сомнений поставить диагноз, проходит от 5 до 10 лет. Связано это с тем, что основной критерий постановки диагноза – рентгенологические признаки сакроилеита (длительного воспаления крестцово-подвздошных суставов).

Наличие только болевого синдрома в спине заставляет таких пациентов долго лечиться у неврологов, не попадая на прием к ревматологу. Назначение в такой ситуации анализа на HLA-B27 может быть достаточным основанием для направления в последующем пациента к ревматологу. Это позволит начать специфическую терапию на ранней стадии заболевания и уменьшить вероятность инвалидизации. Особенно важно это в диагностике подобных болезней у детей.

Литература:

1. Лапин С.В., Мазина А.В., Булгакова Т.В. и др. Методическое руководство по лабораторной диагностике аутоиммунных заболеваний. Санкт-Петербурт, изд. СПбГМУ, 2011.
2. McHugh K, Bowness P. The link between HLA-B27 and SpA--new ideas on an old problem. Rheumatology(Oxford). 2012 Sep;51(9):1529-39.